聚积细胞样品进行WB执行检测卵白质品貌
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聚积细胞样品进行WB执行检测卵白质品貌
发布日期:2024-06-21 16:24    点击次数:201

聚积细胞样品进行WB执行检测卵白质品貌

CHX是灰链霉菌的产品,时时用于检测卵白质或酶的半衰期。CHX胁制细胞总卵白合成的旨趣是阻断真核细胞核糖体易位进程。用稳当浓度的CHX处治细胞(不异为100μg/mL)不同时期点,聚积细胞样品进行WB执行检测卵白质品貌。

半衰期短的卵白质会跟着时期的推移赶快降解,而半衰期长的卵白质跟着时期的推移,降解的很少。

CHX常用于检测卵白质的领悟性和半衰期。不才面这个案例中,用50μg/mL的CHX处治6h和12h,WB检测卵白抒发,发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。

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敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解(Ying Miao et al. 2023. bio protocol)

还不知谈检测卵白质领悟性和半衰期时期的家东谈主不错先望望往期著述:《卵白质领悟性、半衰期执行的旨趣、时期和利用》

MG132又称苄氧羰基-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸,是一种多肽醛。MG132是全球熟知的卵白酶体胁制剂,MG132的作用机制是通过与卵白酶体20S催化中枢的活性位点苏氨酸残基中的羟基半缩醛响应,从而胁制卵白酶体活性。

不才面这个案例中,使用MG132好像胁制卵白质的泛素化降解,徐州金虎工具制造有限公司促进泛素化卵白的蕴蓄, 首页-湖盛佳香料有限公司从而更容易检测到卵白质的泛素化。如下图的图C所示:在不添加MG132时, 卓联新动力有限公司即使Bmi-1和Ezh2能被泛素化,也可能会赶快降解,从而检测不到信号,计算机MG132处治胁制卵白酶体,导致泛素化的卵白蕴蓄,因此更容易检测到泛素化的卵白。

需要十分顾惜的是,如下图A和B所示,在不添加MG132时,可能检测不到ub信号。

需要泛素化质粒的不错有关小编。

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MG132促进卵白质泛素化(Sivaprakasam B et al. 2012. J Biol Chem)

另外,CHX和MG132也好像诱导起来考证卵白质的领悟性和降解路子。举例不才面这个案例中,左边是MG132和CHX集聚处治,右边是只用CHX处治,w/o MG132示意 without MG132。阐发MG132增多了a-SMN卵白的领悟性,而MG132莫得增多FL-SMN的卵白领悟性。

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MG132对a-SMN和FL-SMN卵白半衰期的影响(Denise Locatelli et al. 2015. PLOS ONE)

全球不错笔据我方的执行地方纯真选拔胁制剂单零丁治或集聚处治,从而更成心于发现问题所在计算机,更好的分析效果。

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